免疫熒光(Immunofluorescence，IF)技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)，將抗體分子與一些示蹤標(biāo)記結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位和定量。免疫熒光技術(shù)可以對(duì)目的蛋白在細(xì)胞中的定位提供更高的分辨率、更高的靈敏度，是目前在細(xì)胞水平進(jìn)行蛋白量(定性為主)及蛋白定位分析最常用的方法。

載基可將玻璃切片上的所有信息進(jìn)行采集形成高分辨率的數(shù)字切片，防止熒光淬滅；可任意倍數(shù)進(jìn)行觀察；可滿(mǎn)足臨床、科研、教學(xué)等多種用途。

? 載基優(yōu)勢(shì)

1.采用進(jìn)口abcam、CST、Santa、omnimabs抗體；
2.光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡齊全，一站式完成實(shí)驗(yàn)；
3.具有多年免疫熒光實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)；
4.可免費(fèi)使用我司細(xì)胞庫(kù)、組織庫(kù)已有細(xì)胞或石蠟切片，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)；
5.提供完整的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括實(shí)驗(yàn)儀器、試劑、方法步驟、結(jié)果、數(shù)據(jù)分析、結(jié)論等)。

客戶(hù)提供：新鮮樣本/固定后的樣本/包埋后的蠟塊/切片和一抗，新鮮樣本干冰運(yùn)輸；固定液樣本、蠟塊常溫運(yùn)輸；石蠟切片、組織芯片冰袋運(yùn)輸；冰凍切片冰袋+干冰運(yùn)輸；抗體冰袋運(yùn)輸；細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定15min后用無(wú)菌PBS洗滌后用無(wú)菌PBS浸泡，冰袋運(yùn)輸。

? 實(shí)驗(yàn)步驟

1.抗原修復(fù)：將 EDTA 抗原修復(fù)液（PH9.0）用蒸餾水稀釋 50 倍，并加熱至沸騰。將脫蠟水化后的切片置于耐高溫染色架上，放入不銹鋼鍋中；將功率調(diào)至最小(處于保溫狀態(tài))，蓋上鍋蓋，繼續(xù)加熱 20 分鐘后，離開(kāi)熱源，自然冷卻 10 分鐘；用自來(lái)水沖淋不銹鋼鍋外壁使之冷卻，待鍋中液體冷卻至室溫后取出切片;蒸餾水沖洗 3 分鐘 x3 次；用 PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次；
2.滅活：除去 PBS，在切片上滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫下孵育 10 分鐘，用PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次；
3.封閉：除去 PBS，在切片上滴加 5%BSA 封閉液室溫下孵育 30min；
4.加一抗：輕輕甩掉封閉液，切片上滴加第一抗體，4 度孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）；
5.加二抗：取出濕盒，復(fù)溫 40min 左右，用 PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次，除去 PBS，切片上滴加與一抗相應(yīng)種屬的熒光二抗，室溫下避光孵育 1h，PBS 沖洗 3x3 分鐘；
6.DAPI 復(fù)染細(xì)胞核：除去 PBS,切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加 DAPI 染液，避光室溫孵育10min，PBS 沖洗 3x3 分鐘
7.淬滅組織自發(fā)熒光：除去 PBS，在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑避光室溫孵育 5min，流水沖洗 10min；
8.封片：切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片；
9.鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI 紫外激發(fā)波長(zhǎng) 330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng) 420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC 激發(fā)波長(zhǎng) 465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng) 515-555 nm，發(fā)綠光；CY3 激發(fā)波長(zhǎng) 510-560，發(fā)射波長(zhǎng) 590nm，發(fā)紅光。
10.結(jié)果觀察：DAPI 染出來(lái)的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽(yáng)性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光或綠光。